Matrigel基質膠是什么,里面包含哪些成分?
Matrigel是來源于EHS小鼠肉瘤的基底膜基質,其中含有約60%層粘連蛋白、30% IV 膠原和8%的巢蛋白,還含有基底膜聚糖、TGF-?、表皮生長因子、類胰島素生長因子、組織纖溶酶原及其他生長因子。
? Matrigel有哪些種類?
康寧Matrigel主要有常規(guī)標準型(Standard)、高濃度(HC)、無酚紅(Phenol red-free)、生長因子減量型(Growth factor reduced, GFR)和人胚胎干細胞專用(hESC-qualified)幾個類別。
標準型Matrigel:濃度范圍大致為8-12mg/ml
高濃度Matrigel:濃度范圍大致為18-22mg/ml
無酚紅Matrigel:不含酚紅,產品完全融化后顏色透明
生長因子減量型Matrigel:Matrigel里包含的生長因子經過減量處理
人胚胎干細胞專用Matrigel:經過對hESC培養(yǎng)的測試,可以用于人胚胎干細胞的培養(yǎng)
? 如何選擇Matrigel?
? Matrigel到貨需要注意什么?
首先確認是否由干冰運輸,到貨時包裝箱中干冰是否足量,查看Matrigel液面是否基本水平,以及瓶身側壁、瓶口有無Matrigel融化的痕跡,以確保運輸質量;若發(fā)現(xiàn)問題,請及時拍照記錄,并聯(lián)系經銷商反饋。
? 如何儲存Matrigel?
收到產品并確認到貨情況無異常后,請將Matrigel儲存于-20℃冰箱,長期保存可置于-80℃冰箱。切勿將Matrigel儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存,應避免Matrigel反復凍融。
? Matrigel顏色為什么會有不一樣?
無酚紅Matrigel沒有顏色,完全融化后應是透明的;
含酚紅Matrigel顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化,這些顏色變化是正?,F(xiàn)象。因為酚紅存在時,在溫度、pH不同的情況下液體會出現(xiàn)顏色的差異。
? 怎么融化Matrigel?Matrigel融化需要多長時間?
將整瓶Matrigel埋沒在碎冰盒中,再將冰盒置于4℃冰箱中,建議放在冰箱靠后的位置,放置過夜融化。確保碎冰足量。融化后轉動瓶子查看Matrigel是否全部融化,確認無冰晶或膠塊殘留。我們建議過夜融化,高蛋白濃度的Matrigel可能需要更多的時間。請勿將Matrigel瓶直接放在4℃冰箱中融化,也請勿將冰盒及Matrigel放置在冰箱門上或冰箱靠門的位置。以下圖片可供參考:
? 融化后Matrigel應該是什么樣的?
標準型Matrigel融化后應為澄清的液體,無酚紅的為澄清且透明;蛋白濃度越高,融化后液體越粘稠。具體請參考下圖Matrigel融化后的照片,左邊兩瓶是高濃度型,右邊兩瓶是標準型:
? 如何分裝Matrigel?
建議根據(jù)您一次的使用量做小量分裝,。請注意與Matrigel接觸的所有耗材如槍頭、管子均需事先預冷,且在冰上無菌操作。分裝后的Matrigel可保存在-20℃或-80℃冰箱。建議保留瓶子的標簽或記錄下貨號(Catalog Number)及批次號(LOT number),以便后續(xù)查詢追蹤相關信息。
? Matrigel融化時發(fā)現(xiàn)有凝膠,融化不了是怎么回事?
Matrigel對溫度非常敏感,超過10℃即開始成膠,超過22℃成膠速度會更快。如果到貨情況正常,出現(xiàn)此種現(xiàn)象應該是融化操作不規(guī)范或者融化期間環(huán)境溫度升高導致部分凝膠。請一定嚴格按照融化操作規(guī)范執(zhí)行,確保融化時保持低溫環(huán)境。
? 如何稀釋Matrigel?
一般可用預冷的無血清培養(yǎng)基或pH7.4的PBS稀釋。由于批次之間的濃度差異,除354277外,推薦按照特定的工作終濃度稀釋,而不要以比例或稀釋倍數(shù)稀釋。
? Matrigel濃度去哪兒查詢?
可以在康寧官網,輸入貨號,選擇quality certificate按鈕?;蛑苯狱c擊網址:https://www.corning.com/asean/en/products/life-sciences/resource-library.html進入質檢證書查詢頁面,輸入貨號與批號,點擊查找,獲得相應COA文件。該文件中有蛋白濃度的說明;
對于干細胞專用型Matrigel,COA中不包含濃度說明,僅以稀釋系數(shù)為實驗參照,如需了解具體濃度信息,請聯(lián)系康寧技術支持。
? Matrigel使用濃度?
凝膠濃度:在需要Matrigel凝膠的實驗中,工作濃度需大于3 mg/mL
包被濃度:包被實驗時Matrigel無需成膠,因此包被濃度應小于凝膠濃度(即3mg/mL)
工作濃度需要根據(jù)具體的細胞類型進行預實驗測試。對于侵襲實驗,建議初始濃度設置在200-300 μg/mL之間,再根據(jù)特定的實驗體系進行優(yōu)化
血管生成實驗濃度:請務必使用大于10 mg/mL的Matrigel產品,康寧提供挑選批次和批次預留的服務,請您在訂購產品時向代理商說明您的要求
體內皮下注射實驗濃度:由于是體內實驗,為了避免成膠不完全,建議終濃度在4 mg/mL以上
? 什么是稀釋因子(Dilution Factor)?
對于干細胞專用型Matrigel,其COA中不包含濃度說明,但是有稀釋因子說明。稀釋因子的數(shù)值也是批次特異性的,每個批次的稀釋因子是根據(jù)蛋白質濃度計算的??梢园凑障♂屢蜃拥臄?shù)值來確定使用的量。比如某一批次的稀釋因子為238 μL,則可將238 μL的hESC-qualified Matrigel原液加入到25ml DMEM/F12中,混勻后可鋪4塊六孔板,每孔使用1ml Matrigel稀釋液進行包被。具體實驗步驟可見相應COA文件。
? 使用Matrigel時需要注意哪些方面?
所有接觸Matrigel的試劑耗材產品都需要預冷,操作過程應全程在冰上操作,確保低溫環(huán)境。Matrigel對溫度十分敏感,一旦超過10℃,即開始凝膠。以下圖片可供參考:
? 如何區(qū)別包被和凝膠?
包被指Matrigel濃度小于成膠濃度(即<3 mg/mL),在細胞培養(yǎng)器皿表面形成薄薄的蛋白層而不凝成膠凍狀物質;凝膠指Matrigel濃度大于等于成膠濃度(即≥3 mg/mL),在細胞培養(yǎng)器皿表面能夠形成膠凍狀物質
? Matrigel凝膠鋪板使用量是多少?
薄膠(Thin Gel):50μL/cm2,常應用于細胞附著和增殖;厚膠(Thick Gel):150-200 μL/cm2,常應用于3D細胞培養(yǎng);各培養(yǎng)器皿的有效培養(yǎng)面積請參考下表:
? Matrigel包被后的培養(yǎng)器皿能存放多久?
包被過的培養(yǎng)器皿最好當天使用,具體情況取決于實驗目的。在需要保存的情況下,Matrigel包被之后的培養(yǎng)器皿可以于37 ℃恒溫箱或4 ℃冰箱中放置最長一周的時間。保存時培養(yǎng)表面需要保持濕潤,請勿將包被工作液從培養(yǎng)器皿中吸出。(稀釋后未用完的Matrigel不建議保留再用)。
? 凝膠后的Matrigel能否融化后再使用?
Matrigel一旦成膠,是很難完全恢復的??梢試L試將Matrigel埋在碎冰中,放入4℃冰箱,24-48小時后觀察能否融化。請注意,對于該處理方式后融化的Matrigel,其性能是無法保證的。
? 如何從Matrigel中收獲細胞?
推薦使用康寧Dispase或Cell Recovery Solution 產品。Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液,不會損傷細胞或細胞表面蛋白。此外,Corning Dispase還可用于組織分離。對于代謝研究和RNA抽提,建議在4℃使用Corning Cell Recovery Solution進行非酶反應的細胞收獲,因為Corning Matrigel中含有痕量的RNA,進行RNA分析時,應設置僅含有Matrigel(不接種細胞)的陰性對照組。
? 侵襲實驗中,Matrigel鋪板幾個小時,為什么不會成膠?
在侵襲實驗中,使用Matrigel的目的是包被小室表面,形成一層基質蛋白薄膜來模擬細胞外基質,其使用濃度小于3mg/ml,沒有達到成膠濃度,是不會成膠的。